1. Luokittelu
Geelielektroforeesi jaetaan pystytyyppeihin (mukaan lukien pylväsgeelit ja laattageelit) ja horisontaalisiin tyyppeihin (pääasiassa laattageelit) (Kuva 6-18). Yleensä pystysuora erottelu on hieman parempi kuin vaakasuora, mutta vaakasuoralla geelivalmisteella on vähintään neljä etua: koko geelin alla on tuki, mikä mahdollistaa vähäpitoisen agaroosin käytön; on mahdollista valmistaa eri spesifikaatioita omaavia agaroosigeelilevyjä; geelin valmistus ja näytteen lataaminen ovat kätevämpiä; elektroforeesikammio on helppo rakentaa ja kustannustehokas. Koska vaakasuuntainen elektroforeesi suoritetaan agaroosigeelilevyn ollessa täysin upotettuna noin 1 mm elektroforeesipuskurin pinnan alapuolelle, sitä kutsutaan myös upotetuksi elektroforeesiksi.
Elektroforeesisäiliö DYCP-31DN agaroosigeelielektroforeesiin
2. Puskurijärjestelmä
Nukleiinihappoerotuksessa useimmat järjestelmät ottavat käyttöön jatkuvia järjestelmiä. Yleisesti käytettyjä elektroforeesipuskureita ovat TBE (0,08 mol/l Tris·HCl, pH 8,5, 0,08 mol/l boorihappo, 0,0024 mol/l EDTA) ja THE (0,04 mol/l Tris·HCl, pH 7,8, 0,02 mol/l) natriumasetaatti, 0,0018 mol/l EDTA) puskuri. Nämä puskurit valmistetaan yleensä 10x varastoliuoksina ja laimennetaan vaadittuun pitoisuuteen käytön aikana. Lineaarisen ja sirkulaarisen DNA:n migraationopeudet agaroosigeelissä vaihtelevat käytetyn puskurin mukaan. THE-puskurissa lineaarisen DNA:n migraationopeus on suurempi kuin sirkulaarisen DNA:n, kun taas TBE-puskurissa päinvastoin.
3. Agaroosigeelin valmistus
(1) Vaakasuora agaroosigeelin valmistus
(a) Valmista tarvittava pitoisuus agaroosigeeliä käyttämällä 1x elektroforeesipuskuria.
(b) Kuumenna agaroosi liukenemisen loppuun asti joko kiehuvassa vesihauteessa, magneettisekoittimessa tai mikroaaltouunissa. Jäähdytä agaroosiliuos 55 °C:seen ja lisää etidiumbromidiväriä (EB) lopulliseen pitoisuuteen 0,5 μg/ml.
(c) Tiivistä lasi- tai akryylilevyjen reunat pienellä määrällä agaroosigeeliä, lisää kampa ja aseta kampahampaat noin 0,5–1,0 mm levyn yläpuolelle.
(d) Kaada sulatettua agaroosigeeliliuosta jatkuvasti lasi- tai akryylilevymuottiin (paksuus riippuu DNA-näytteen tilavuudesta) välttäen ilmakuplien pääsyä. Anna jähmettyä luonnollisesti huoneenlämmössä.
(e) Poista kampa varovasti täydellisen jähmettymisen jälkeen. Lisää sopiva määrä elektroforeesipuskuria geelisäiliöön varmistaen, että geelilevy on upotettuna noin 1 mm elektroforeesipuskurin pinnan alapuolelle.
(2) Pysty agaroosigeelin valmistus
(a) Poista rasva tai jäämät lasilevyistä pesemällä etanolilla.
(b) Aseta välilevyt etu- ja takapadon väliin, kohdista välilevyjen reunat etu- ja takapadon kanssa ja kiinnitä ne puristimilla.
(c) Lisää 2 % agaroosia 1x puskurissa välilevyjen reunojen väliin muodostamaan 1 cm korkea agaroositulppa geelin valukammion pohjalle.
(d) Kaada sulatettu agaroosigeeli halutussa pitoisuudessa, valmistettu 1x puskurissa, geelikammioon enintään 1 cm yläosan alapuolelle.
(e) Aseta kampa paikalleen välttäen ilmakuplien jäämistä kamman hampaiden alle. Joskus kampahampaisiin saattaa ilmaantua ryppyjä agaroosigeelin jäähtymisen aikana; tällaisissa tapauksissa lisää vain sulatettua agaroosia yläosaan sen kiinteyttämiseksi.
(f) Poista kampa. Puskurin vuotamisen estämiseksi latausaukossa sulje agaroosigeelilevyn ja elektroforeesikammion välinen liitos 2 % agaroosilla ja lisää tarvittava määrä puskuria.
(g) Lisää 1x elektroforeesipuskuri geelikammioon.
(h) Lataa DNA-näytteet varovasti puskurin alla olevaan agaroosigeeliin.
Lisätietoa agaroosigeelielektroforeesin perustiedoista jaamme ensi viikolla. Toivottavasti näistä tiedoista on apua kokeilussasi.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) on erikoistunut elektroforeesiinstrumenttien valmistukseen yli 50 vuoden ajan oman ammattitaitoisen teknisen tiimimme ja T&K-keskuksen kanssa. Meillä on luotettava ja täydellinen tuotantolinja suunnittelusta tarkastukseen ja varasto sekä markkinointituki. Päätuotteemme ovat elektroforeesikenno (säiliö/kammio), elektroforeesivirtalähde, sininen LED-läpivalaisin, UV-transilluminaattori, geelikuva- ja analyysijärjestelmä jne.
Etsimme nyt kumppaneita, sekä OEM-elektroforeesisäiliö että jakelijat ovat tervetulleita.
Jos sinulla on ostosuunnitelma tuotteillemme, älä epäröi ottaa meihin yhteyttä. Voit lähettää meille viestin sähköpostitse[sähköposti suojattu]tai[sähköposti suojattu], tai soita meille numeroon +86 15810650221 tai lisää Whatsapp +86 15810650221 tai Wechat: 15810650221.
Skannaa QR-koodi lisätäksesi Whatsapp tai WeChat.
Postitusaika: 07.12.2023