Geelielektroforeesi on yksi tärkeimmistä menetelmistä, joita molekyylibiologiassa käytetään DNA:n analysointiin. Tämä menetelmä sisältää DNA-fragmenttien kulkeutumisen geelin läpi, jossa ne erotetaan koon tai muodon perusteella. Oletko kuitenkin koskaan havainnut virheitä elektroforeesikokeiden aikana, kuten tahriintuneita juovia agaroosigeelissä tai ei juovia geelissä? Mikä voisi olla syynä näihin virheisiin?
Teknikkomme ovat koonneet tähän yhteenvedon vianetsinnästä.
1. Levitetty nauhat agaroosigeelille
●DNA hajosi. Vältä nukleaasikontaminaatiota.
● Elektroforeesipuskuri ei ole tuore. Toistuvan elektroforeesipuskurin käytön jälkeen ionivahvuus pienenee ja sen pH-arvo nousee, jolloin puskurin kapasiteetti heikkenee, mikä vaikuttaa elektroforeesivaikutukseen. On suositeltavaa vaihtaa elektroforeesipuskuri usein.
● Käytettiin vääriä elektroforeesiolosuhteita. Älä anna jännitteen ylittää 20 V/cm ja pidä lämpötila <30 °C elektroforeesin aikana. Jättiläis-DNA-juosteen elektroforeesia varten lämpötilan tulee olla <15°C. Tarkista, että elektroforeesipuskurissa on tarpeeksi puskurikapasiteettia.
● Geeliin ladattiin liikaa DNA:ta. Vähennä DNA:n määrää.
● Liian paljon suolaa DNA:ssa. Käytä etanolisaostusta ylimääräisten suolojen poistamiseen edistyneessä.
● DNA oli kontaminoitunut proteiinilla. Käytä fenoliuuttoja proteiinin poistamiseen pitkälle.
● DNA denaturoitiin. Älä lämmitä ennen elektroforeesia. Laimenna DNA puskuriin 20 mM NaCl:lla.
2. Anomaliat DNA-kaistan migraatio
● λHind III -fragmentin COS-kohdan renaturaatio. Kuumenna DNA:ta 5 minuuttia 65 °C:ssa ennen elektroforeesia ja jäähdytä sitten jääyksikössä 5 minuuttia.
● Käytettiin vääriä elektroforeesiolosuhteita. Älä anna jännitteen ylittää 20 V/cm ja pidä lämpötila <30 °C elektroforeesin aikana. Tarkista, että elektroforeesipuskurissa on tarpeeksi puskurikapasiteettia.
● DNA denaturoitiin. Älä lämmitä ennen elektroforeesia. Laimenna DNA puskuriin 20 mM NaCl:lla.
3. Heikkoja tai ei ollenkaan DNA-juovia agaroosigeelissä
● Geeliin ladattu DNA:n määrä tai pitoisuus ei ollut riittävä. Lisää DNA:n määrää. Polyakryyliamidigeelielektroforeesi on hieman herkempi kuin agaroosielektroforeesi, ja näytteen kuormitusta voidaan vähentää asianmukaisesti.
● DNA on hajonnut. Vältä nukleaasikontaminaatiota.
● DNA ajettiin elektroforeesilla pois geelistä. Elektroforoi geeliä vähemmän aikaa, käytä pienempää jännitettä tai käytä korkeampaa geeliprosenttia.
● Etidiumbromidilla värjätyn DNA:n visualisointiin käytettiin väärää W-valolähdettä. Käytä lyhyen aallonpituuden (254 nm) W valoa parantaaksesi herkkyyttä.
4. DNA-nauhat puuttuvat
●Pienikokoiselle DNA:lle tehtiin elektroforeesi pois geelistä. Elektroforoi geeliä vähemmän aikaa, käytä pienempää jännitettä tai käytä korkeampaa geeliprosenttia.
● Vaikea erottaa saman molekyylin DNA-juovia. Pidennä elektroforeesiaikaa ja tarkista pitoisuusgeelistä varmistaaksesi, että geeliä käytetään oikein.
● DNA denaturoitiin. Älä lämmitä ennen elektroforeesia. Laimenna DNA puskuriin 20 mM NaCl:lla.
● DNA-säikeet ovat valtavia, eikä tavanomainen geelielektroforeesi sovellu. Analysoi pulssigeelielektroforeesia.Mitä muita ongelmia sinulla on ollut agaroosigeelielektroforeesin kanssa? Tutkimme lisää oppaita varten tulevaisuudessa.
Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) on erikoistunut yritys, joka keskittyy elektroforeesiin liittyviin tuotteisiin Kiinassa. Sen tarina alkaa vuodesta 1970, jolloin Kiina ei ollut vielä aloittanut uudistus- ja avautumisaikaa. Liuyi Bitotechillä on vuosien kehitystyön kautta oma tuotemerkki, joka tunnetaan Liuyi-brändinä kotimaan elektroforeesituotteiden markkinoilla.
Liuyi-brändillä on yli 50-vuotinen historia Kiinassa ja yritys voi tarjota vakaita ja laadukkaita tuotteita kaikkialla maailmassa. Vuosien kehitystyön ansiosta se on valintasi arvoinen!
Liuyi Biotechin vaakasuuntaiset elektroforeesikennot (säiliöt/kammiot) ovat korkealaatuisia ja hyvännäköisiä. Erikokoisilla geelialustalla ne voivat täyttää erilaiset kokeelliset vaatimukset. Meillä on oma tekninen tiimimme ja tehdas. Suunnittelusta valmistukseen, raaka-aineista tärkeimpiin osiin, voimme hallita koko prosessia. DYCP 31 -sarja on tarkoitettu DNA-elektroforeesiin, jotka ovat malliDYCP-31BN, DYCP-31CN,DYCP-31DN, jaDYCP-31E. Erot niiden välillä ovat geelikoot ja hinta. Tarjoamme asiakkaillemme täysikokoisia tuotteita. MalliDYCP-32Cvoi tehdä suurimman geelin 250mm * 250mm.
Sillä välin suosittelemme elektroforeesivirtalähdettämmeDYY-6C,DYY-6DjaDYY-10Celektroforeesikennoillemme (säiliöt/kammiot) DYCP-31- ja 32-sarjoillemme.
Jos haluat lisätietoja tuotteista, vieraile tällä verkkosivustolla saadaksesi lisätietoja, ja tervetuloa ottamaan meihin yhteyttä sähköpostitse kertoaksesi, mitä haluat, ja katsomaan, voimmeko tarjota sinulle ratkaisuja.
Jos haluat lisätietoja meistä, ota meihin yhteyttä sähköpostitse[sähköposti suojattu], [sähköposti suojattu].
Postitusaika: 09-09-2022