Periaate
Selluloosaasetaattikalvoelektroforeesi on elektroforeesimenetelmä, jossa selluloosa-asetaattikalvoa käytetään kantajana. Ilmiötä, jossa varautuneet hiukkaset liikkuvat kohti vastakkaista elektrodia sähkökentän vaikutuksesta, kutsutaan elektroforeesiksi. Koska jokaisella proteiinilla on erityinen isoelektrinen piste, jos proteiini laitetaan liuokseen, jonka pH on alempi kuin sen isoelektrinen piste, proteiini varautuu positiivisesti ja siirtyy kohti negatiivista elektrodia. Päinvastoin, se siirtyy positiiviseen napaan. Koska sähkökentässä liikkuvien proteiinimolekyylien nopeus liittyy niiden varaukseen, molekyylien muotoon ja kokoon, eri proteiinit voidaan erottaa elektroforeesilla. Seerumi sisältää erilaisia proteiineja, joilla kaikilla on isoelektriset pisteet pH-arvossa 7,5 tai vähemmän. Kun seerumi asetetaan pH 8,6:n puskuriin elektroforeesia varten, kaikki seerumin proteiinit ovat negatiivisesti varautuneita ja siirtyvät kohti positiivista puolta sähkökentässä. Koska eri seerumiproteiineilla on erilaiset varaukset samassa pH:ssa, molekyylihiukkaset ovat erikokoisia ja siten erilainen migraationopeus ja ne erotetaan elektroforeesilla. Seerumiproteiinien isoelektriset pisteet ja molekyylipainot on esitetty alla olevassa taulukossa:
| Proteiini | Isoelektriset pisteet (PI) | Molekyylipaino |
| Albumiini | 4.88 | 69 000 |
| α1-gluuliini | 5.00 | 200 000 |
| α2-gluuliini | 5.06 | 300 000 |
| p-gluuliini | 5.12 | 9 000 - 150 000 |
| y-gluuliini | 6,85-7,50 | 156 000 - 300 000 |
Kokeen tarkoituksena on erottaa eri proteiinit veriseerumista selluloosa-asetaattikalvon (lyhennettynä CAM) avulla tukiväliaineena. CAM on eräänlainen vaahdotettu loosekalvo, jolla on hyvä yhtenäinen ja paksuus 0,1–1,5 mm, jolla on tietty veden imeytyminen.
Materiaalit, instrumentit ja reagenssit CAM-elektroforeesiin
Näytteet:terveen ihmisen veriseerumi
Instrumentti:virtalähde DYY-6C, elektroforeesisäiliö DYCP-38C, erinomainen näytteen lataus WD-9404
Reagenssit
1) selluloosa-asetaattikalvo 7 x 9 cm
2) PH 8,6 barbitolipuskuriliuos (ionivahvuus 0,05-0,09, se on 0,06 tid.): ota 1,84 g dietyylibarbituurihappoa ja sitten 1,03 g dietyylinatriumpentobarbitaalia, lisää tislattua vettä lämmittääkseen liukenemaan ja valmista. jopa 1000 ml;
3) Tahra: Ponceau S 0,2 g, trikloorietikkahappo 3 g, lisää 100 ml tislattua vettä;
4) TBS/T tai PBS/T: 45 ml 95 % etanolia, 5 ml jääetikkaa, lisää 50 ml tislattua vettä;
5) Puhdistusliuos: 70 ml vedetöntä etanolia, 30 ml jääetikkaa.
Kokeilumenetelmäd
1) Valmistele kalvo: Upota kalvo barbitolipuskuriliuokseen 30min-8h ja ota se pois, poista ylimääräinen liuos imupaperilla.
2) Näytteiden lataaminen: Erottele kalvon karkea puoli ja sileä puoli ja merkitse viiva 1,5 cm:n etäisyydelle yläpäästä karkealle puolelle. Lataa näytteet erinomaisella näytteenottotyökalulla karkealta puolelta. Huomautus: Näytteet tulee ladata kalvon karkealle puolelle. Kun seeruminäytteet ovat täysin tunkeutuneet kalvoon, käännä kalvo ympäri, aseta karkea puoli (näytteet) alaspäin säiliöön ja näytteiden pää asetetaan negatiiviseen elektrodiin.
3) Elektroforeesi: Kytke virta päälle, 0.4～0,6 m A/cm kalvo, käyttöaika on 30-45 min. Katkaise virta elektroforeesin suorittamisen jälkeen.
4) Tahraa ja puhdista: Ota kalvo pois säiliöstä ja upotait väriaineliuokseen 5 minuutin ajan ja puhdista se sitten puhdistusliuoksessa yhä uudelleen ja uudelleen 3-4 kertaa, kunnes taustaväri on kirkas. Seerumin proteiinit tulee näyttää vyöhykkeissä, ja normaalisti on viisi vyöhykettä, jotka muodostavat yläpään merkittyyn viivan yläpuolelle, albumiini, α1-gluuliini, α2-gluuliini, β-gluuliini, γ-gluuliini.
5) Säilytys: laita kuiva elektroforeesibändipuhdistusliuoksessa 10-15 minuuttia ja ota se sitten pois ja kiinnitä puhtaalle lasille, kuivumisen jälkeen siitä tulee läpinäkyvä kalvobändi.
KokeiluTulos
Seeruminäytteiden erotusvaikutus on hyvä, eikä nauhahännän ilmiötä ole. Tulosten toistettavuus vaihtelee koemenetelmistä ja kokeen tekijän menetelmistä johtuen ja toistettavuus on korkea.
Johtopäätös
Nopea kliininen elektroforeesitunnistusjärjestelmä (ElektroforeesisäiliöDYCP-38C,virtalähdeDYY-6C ja ylivoimainen näytelataus WD-9404) valmistamammeyritys Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdtäyttää kokeelliset vaatimukset,jatulokset ovat toistettavia, yksinkertaisia ja nopeita, sopiviaopetustatutkimusta.
Pekingin LiuyiBiotechnology Co., Ltd on erikoistunut valmistamaan elektroforeesituotteita life science -teollisuudelleon yli 50-vuotinen historia Kiinassa ja yritys voi tarjota vakaita ja laadukkaita tuotteita kaikkialla maailmassa. Vuosien kehitystyön ansiosta se on valintasi arvoinen!
Etsimme nyt kumppaneita, sekä OEM-elektroforeesisäiliö että jakelijat ovat tervetulleita.
Jos haluat lisätietoja meistä, ota meihin yhteyttä sähköpostitse[sähköposti suojattu]tai[sähköposti suojattu].
Postitusaika: 14.11.2022