Hemoglobiinielektroforeesikoe

Kokeiluperiaate

Hemoglobiinielektroforeesi pyrkii havaitsemaan ja vahvistamaan erilaisia ​​normaaleja ja epänormaaleja hemoglobiineja.

Eri hemoglobiinityyppien eri varauksista ja isoelektrisistä pisteistä johtuen tietyssä pH-puskuriliuoksessa, kun hemoglobiinin isoelektrinen piste on pienempi kuin puskuriliuoksen pH, hemoglobiini kantaa negatiivisen varauksen ja kulkee kohti anodia elektroforeesin aikana. Sitä vastoin positiivisen varauksen omaava hemoglobiini liikkuu kohti katodia.

Tietyllä jännitteellä ja tietyn elektroforeesiajan jälkeen hemoglobiinit, joilla on eri varaukset ja molekyylipainot, osoittavat erilaisia ​​​​vaellussuuntia ja -nopeuksia. Tämä mahdollistaa erillisten vyöhykkeiden erottamisen, ja myöhemmin näille vyöhykkeille voidaan suorittaa kolorimetrinen tai elektroforeettinen skannausanalyysi erilaisten hemoglobiinien kvantifioimiseksi. Yleisimmin käytetty menetelmä on pH 8,6 selluloosa-asetaattikalvoelektroforeesi.

Sytoplasmassa glykogeeni- tai polysakkaridiaineissa (kuten mukopolysakkaridit, mukoproteiinit, glykoproteiinit, glykolipidit jne.) olevat etyleeniglykoliryhmät (CHOH-CHOH) hapetetaan perjodihapolla ja muuttuvat aldehydiryhmiksi (CHO-CHO). Nämä aldehydiryhmät yhdistyvät värittömän purppuranpunaisen Schiff-reagenssin kanssa muodostaen purppuranpunaisen väriaineen, joka kerääntyy solun polysakkarideihin. Tämä reaktio tunnetaan jaksollisena happo-Schiff-värjäyksenä (PAS), jota aiemmin kutsuttiin glykogeenivärjäykseksi.

Kokeilumenetelmä

Materiaalit:Selluloosa-asetaattimembraani, elektroforeesilaitteet(DYCP-38C ja virtalähde DYY-6C), Erinomainen näytteen lataustyökalu (pipetti), spektrofotometri, kolorimetriset kyvetit, puskurit.

Puskuri:

(1) pH 8,6 TEB-puskuri: Punnitse 10,29 g Tris, 0,6 g EDTA, 3,2 g boorihappoa ja lisää tislattua vettä 1000 ml:aan.

(2) Boraattipuskuri: Punnitaan 6,87 g booraksia ja 5,56 g boorihappoa ja lisätään tislattua vettä 1000 ml:aan.

Toimenpide:

Phemoglobiiniliuoksen korjaus

Ota 3 ml verta, joka sisältää hepariinia tai natriumsitraattia antikoagulanttina. Sentrifugoi 2000 rpm 10 minuuttia ja hävitä plasma. Pese punasolut kolme kertaa fysiologisella suolaliuoksella (750 rpm, 5 minuutin sentrifugointi joka kerta). Sentrifugoi 2200 rpm 10 minuuttia ja hävitä supernatantti. Lisää yhtä suuri määrä tislattua vettä ja lisää sitten 0,5 kertaa hiilitetrakloridin tilavuus. Ravista voimakkaasti 5 minuuttia ja sentrifugoi sitten 2200 rpm 10 minuuttia ylemmän Hb-liuoksen keräämiseksi myöhempää käyttöä varten.

Kalvon liottaminen

Leikkaa selluloosa-asetaattikalvo suikaleiksi, joiden mitat ovat 3 cm × 8 cm. Liota niitä pH 8,6:n TEB-puskurissa, kunnes ne ovat täysin kyllästyneet, poista sitten ja kuivaa suodatinpaperilla.

Tarkkailu

Pipetoi 10 μl hemoglobiiniliuosta pystysuoraan selluloosa-asetaattikalvolle (karkea puoli), noin 1,5 cm reunasta.

Elektroforeesi

Kaada boraattipuskuriliuos elektroforeesikammioon. Aseta selluloosa-asetaattikalvo täplikäs puoli kammion katodipäähän. Käytä 200 V jännitteellä 30 minuuttia.

Eluointi

Leikkaa HbA- ja HbA2-alueet irti, aseta ne erillisiin koeputkiin ja lisää 15 ml ja 3 ml tislattua vettä. Ravista varovasti, jotta hemoglobiini eluoituu kokonaan, ja sekoita sitten.

Kolorimetria

Nollataan absorbanssi käyttämällä eluointiliuokseen tislattua vettä ja mitataan absorbanssi aallonpituudella 415 nm.

Laskeminen

HbA2(%) = HbA2-putken absorbanssi / (HbA-putken absorbanssi × 5 + HbA2-putken absorbanssi) × 100 %

Koetulosten laskeminen

Viitealue pH:lle 8,6 TEB-puskuriselluloosa-asetaattielektroforeesi: HbA > 95%, HbA2 1% -3,1%

Huomautuksia

Elektroforeesiaika ei saa olla liian pitkä. Selluloosaasetaattikalvo ei saa kuivua elektroforeesin aikana. Lopeta elektroforeesi, kun HbA ja HbA2 ovat selvästi erotettu toisistaan. Pitkäaikainen elektroforeesi voi aiheuttaa vyöhykkeen diffuusiota ja sumentumista.

Vältä käyttämästä liikaa näytettä. Liiallinen hemoglobiinineste voi johtaa nauhan irtoamiseen tai riittämättömään värjäytymiseen, mikä johtaa virheellisesti kohonneisiin HbA-tasoihin.

Estä selluloosa-asetaattikalvon kontaminaatio proteiineilla.

Virta ei saa olla liian korkea; muuten hemoglobiinijuovat eivät välttämättä erota.

Sisällytä aina näytteet normaaleista henkilöistä ja tarvittavat tunnetut epänormaalit hemoglobiinit kontrollina.

Beijing Liuyi Biotechnology valmistaa ammattimaisen hemoglobiinielektroforeesin elektroforeesisäiliön, joka on malliDYCP-38Cselluloosa-asetaattikalvoelektroforeesisäiliö, ja selluloosa-asetaattikalvoelektroforeesisäiliöön on saatavana kaksi elektroforeesivirtalähdemalliaDYY-2CjaDYY-6Cvirtalähde.

Samaan aikaan Beijing Liuyi Biotechnology tarjoaa asiakkaille selluloosa-asetaattikalvon, ja selluloosa-asetaattikalvon kokoa voidaan mukauttaa. Tervetuloa kysymään meiltä näytteitä ja lisätietoja.

Beijing Liuyi -brändillä on yli 50 vuoden historia Kiinassa, ja yritys voi tarjota vakaita ja laadukkaita tuotteita kaikkialla maailmassa. Vuosien kehitystyön ansiosta se on valintasi arvoinen!

Etsimme nyt kumppaneita, sekä OEM-elektroforeesisäiliö että jakelijat ovat tervetulleita.

Jos sinulla on ostosuunnitelma tuotteillemme, älä epäröi ottaa meihin yhteyttä. Voit lähettää meille viestin sähköpostitse[sähköposti suojattu]tai[sähköposti suojattu], tai soita meille numeroon +86 15810650221 tai lisää Whatsapp +86 15810650221 tai Wechat: 15810650221