Johdanto
Geelielektroforeesi on molekyylibiologian perustekniikka, jota käytetään laajalti proteiinien, nukleiinihappojen ja muiden makromolekyylien erottamiseen. Näytetilavuuden, jännitteen ja elektroforeesiajan asianmukainen säätö on ratkaisevan tärkeää tarkkojen ja toistettavien tulosten saavuttamiseksi.Laboratoriokollegamme tarjoaaparhaita käytäntöjä näiden parametrien hallintaan SDS-PAGE-geelielektroforeesin aikana.
Pekingin Liuyi Biotekniikka geeli elektroforeesi tuotteita
Näytemäärä: johdonmukaisuuden varmistaminen
Kun suoritat SDS-PAGE-elektroforeesia, näytteen tilavuus on avaintekijä, joka voi merkittävästi vaikuttaa tulosten resoluutioon. Yleisesti suositellaan 10 µl kokonaisproteiinin lataamista kaivoon. Johdonmukaisuuden varmistamiseksi ja näytteiden diffuusion estämiseksi vierekkäisten kuoppien välillä on tärkeää ladata yhtä suuri määrä 1x latauspuskuria kaikkiin tyhjiin kuoppiin. Tämä varotoimenpide auttaa estämään näytteiden leviämisen viereisille kaistoille, mikä voi tapahtua, jos kaivo jätetään tyhjäksi.
Aloita aina ennen näytteiden lataamista lisäämällä molekyylipainomerkki yhteen kuoppaan. Tämä mahdollistaa proteiinikokojen helpon tunnistamisen elektroforeesin jälkeen.
Jännitteensäätö: Tasapainottava nopeus ja resoluutio
Elektroforeesin aikana käytetty jännite vaikuttaa suoraan sekä nopeuteen, jolla näytteet kulkeutuvat geelin läpi, että erottelun erottelukykyyn. SDS-PAGE:lle on suositeltavaa aloittaa noin 80 V:n matalalla jännitteellä. Tämä alhainen alkujännite mahdollistaa näytteiden kulkemisen hitaasti ja tasaisesti, jolloin ne keskittyvät teräväksi nauhaksi, kun ne tulevat erotusgeeliin.
Kun näytteet ovat menneet kokonaan erotusgeeliin, jännite voidaan nostaa 120 V:iin. Tämä korkeampi jännite nopeuttaa migraatiota varmistaen, että proteiinit erottuvat tehokkaasti niiden molekyylipainon mukaan. On välttämätöntä seurata bromifenolisinisen väriainerintaman etenemistä, mikä osoittaa elektroforeesin valmistumisen. Geeleille, joiden pitoisuus on 10-12 %, 80-90 minuuttia on tyypillisesti riittävä; 15 % geelien käyttöaikaa voi kuitenkin olla tarpeen pidentää hieman.
Ajanhallinta: Tietäen milloin lopettaa
Ajoitus on toinen kriittinen tekijä geelielektroforeesissa. Geelin käyttäminen liian pitkään tai liian lyhyenä ajanjaksona voi johtaa epäoptimaaliseen erottumiseen. Bromifenolisinisen väriaineen kulkeutuminen on hyödyllinen indikaattori: kun se saavuttaa geelin pohjan, on yleensä aika lopettaa ajo. Tavallisille geeleille, kuten 10-12 %, elektroforeesin kesto noin 80-90 minuuttia on tyypillisesti riittävä. Suuremman prosenttiosuuden geeleillä, kuten 15 %, ajoaikaa tulisi pidentää proteiinien täydellisen erottumisen varmistamiseksi.
Puskurin hallinta: puskurien uudelleenkäyttö ja valmistelu
Elektroforeesipuskuria voidaan käyttää uudelleen 1-2 kertaa laboratoriosi erityisolosuhteista riippuen. Parhaan tuloksen saavuttamiseksi on kuitenkin suositeltavaa valmistaa tuore 10x puskuri ja laimentaa se juuri ennen käyttöä. Tämä varmistaa, että puskuri säilyttää tehonsa, mikä johtaa luotettavampiin elektroforeesituloksiin.
Pekingin Liuyi Biotekniikka geeli elektroforeesi tuotteita
Säätämällä huolellisesti näytteen määrää, jännitettä ja elektroforeesiaikaa voit parantaa merkittävästi geelielektroforeesitulosten tarkkuutta ja toistettavuutta. Näiden parhaiden käytäntöjen käyttöönotto laboratoriotyössäsi auttaa sinua saavuttamaan selkeämpiä ja erottuvampia vyöhykkeitä, mikä johtaa parempaan dataan loppupään analysointia varten.
Jos sinulla on lisää hyviä menetelmiä geelielektroforeesikokeen optimointiin, tervetuloa keskustelemaan kanssamme!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) on erikoistunut elektroforeesiinstrumenttien valmistukseen yli 50 vuoden ajan oman ammattitaitoisen teknisen tiimimme ja T&K-keskuksen kanssa. Meillä on luotettava ja täydellinen tuotantolinja suunnittelusta tarkastukseen ja varasto sekä markkinointituki. Päätuotteemme ovat elektroforeesikenno (säiliö/kammio), elektroforeesivirtalähde, sininen LED-läpivalaisin, UV-läpivalaisin, geelikuva- ja analyysijärjestelmä jne. Toimitamme myös laboratoriolaitteita, kuten PCR-instrumentin, pyörresekoittimen ja sentrifugin laboratorioon.
Jos sinulla on ostosuunnitelma tuotteillemme, älä epäröi ottaa meihin yhteyttä. Voit lähettää meille viestin sähköpostitse[sähköposti suojattu]tai[sähköposti suojattu], tai soita meille numeroon +86 15810650221 tai lisää Whatsapp +86 15810650221 tai Wechat: 15810650221.
Skannaa QR-koodi lisätäksesi Whatsapp tai WeChat.
Postitusaika: 20.8.2024