Polyakryyliamidigeelielektroforeesi
Geelielektroforeesi on perustavanlaatuinen tekniikka laboratorioissa kaikilla biologisilla tieteenaloilla, mikä mahdollistaa makromolekyylien, kuten DNA:n, RNA:n ja proteiinien, erottamisen. Erilaiset erotusvälineet ja -mekanismit mahdollistavat näiden molekyylien osajoukkojen erottamisen tehokkaammin hyödyntämällä niiden fysikaalisia ominaisuuksia. Erityisesti proteiineille polyakryyliamidigeelielektroforeesi (PAGE) on usein valittu tekniikka.
PAGE on tekniikka, joka erottaa makromolekyylejä, kuten proteiineja, perustuen niiden elektroforeettiseen liikkuvuuteen, eli analyyttien kykyyn liikkua kohti vastakkaisen varauksen omaavaa elektrodia. PAGE:ssa tämän määrää molekyylin varaus, koko (molekyylipaino) ja muoto. Analyytit liikkuvat polyakryyliamidigeeliin muodostuneiden huokosten läpi. Toisin kuin DNA:n ja RNA:n, proteiinien varaus vaihtelee sisällytettyjen aminohappojen mukaan, mikä voi vaikuttaa niiden toimintaan. Aminohapposarjat voivat myös muodostaa toissijaisia rakenteita, jotka vaikuttavat niiden näennäiseen kokoon ja siten siihen, miten ne pystyvät liikkumaan huokosten läpi. Siksi saattaa joskus olla toivottavaa denaturoida proteiinit ennen elektroforeesia linearisoida ne, jos tarkempaa arviota koosta vaaditaan.
SDS-SIVU
Natriumdodekyylisulfaattipolyakryyliamidigeelielektroforeesi on tekniikka, jota käytetään erottamaan proteiinimolekyylejä, joiden massat ovat 5-250 kDa. Proteiinit erotetaan vain niiden molekyylipainon perusteella. Natriumdodekyylisulfaattia, anionista pinta-aktiivista ainetta, lisätään geelien valmistukseen, joka peittää proteiininäytteiden sisäiset varaukset ja antaa niille samanlaisen varaus-massa-suhteen. Yksinkertaisesti sanottuna se denaturoi proteiinit ja antaa niille negatiivisen varauksen.
Alkuperäinen SIVU
Native PAGE on tekniikka, joka käyttää denaturoimattomia geelejä proteiinien erottamiseen. Toisin kuin SDS PAGE, geelien valmistukseen ei lisätä denaturoivaa ainetta. Tämän seurauksena proteiinien erottuminen tapahtuu proteiinien varauksen ja koon perusteella. Tässä tekniikassa proteiinien konformaatio, laskostuminen ja aminohappoketjut ovat tekijöitä, joista erottaminen riippuu. Proteiinit eivät vaurioidu tässä prosessissa, ja ne voidaan ottaa talteen erotuksen päätyttyä.
Kuinka polyakryyliamidigeelielektroforeesi (PAGE) toimii?
PAGE:n perusperiaate on erottaa analyytit johtamalla ne polyakryyliamidigeelin huokosten läpi sähkövirralla. Tämän saavuttamiseksi akryyliamidi-bisakryyliamidi-seos polymeroidaan (polyakryyliamidi) lisäämällä ammoniumpersulfaattia (APS). Tetrametyylietyleenidiamiinin (TEMED) katalysoima reaktio muodostaa verkkomaisen rakenteen, jossa on huokoset, joiden läpi analyytit voivat liikkua (kuva 2). Mitä suurempi prosenttiosuus akryyliamidin kokonaismäärästä geelissä on, sitä pienempi on huokoskoko, joten sitä pienemmät proteiinit pääsevät läpi. Akryyliamidin ja bisakryyliamidin suhde vaikuttaa myös huokoskokoon, mutta tämä pidetään usein vakiona. Pienemmät huokoskoot vähentävät myös nopeutta, jolla pienet proteiinit pystyvät liikkumaan geelin läpi, mikä parantaa niiden resoluutiota ja estää niitä valumasta nopeasti puskuriin, kun virtaa käytetään.
Laitteet polyakryyliamidigeelielektroforeesiin
Geelielektroforeesikenno (säiliö/kammio)
Polyakryyliamidigeelielektroforeesin (PAGE) geelisäiliö eroaa agaroosigeelisäiliöstä. Agaroosigeelisäiliö on vaakasuora, kun taas PAGE-säiliö on pystysuora. Pystysuoralla elektroforeesikennolla (säiliö/kammio) ohut geeli (yleensä 1,0 mm tai 1,5 mm) kaadetaan kahden lasilevyn väliin ja asennetaan siten, että geelin pohja upotetaan puskuriin yhdessä kammiossa ja yläosa upotetaan puskuriin. toisessa kammiossa. Kun virtaa käytetään, pieni määrä puskuria kulkeutuu geelin läpi yläkammiosta alakammioon. Vahvat puristimet takaavat, että kokoonpano pysyy pystyasennossa, mikä mahdollistaa nopean geelin juoksun tasaisella jäähdytyksellä, mikä johtaa erottuviin nauhoihin.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) valmistaa erikokoisia polyakryyliamidigeelielektroforeesikennoja (säiliöt/kammiot). Mallit DYCZ-20C ja DYCZ-20G ovat pystysuuntaisia elektroforeesikennoja (säiliöitä/kammioita) DNA-sekvensointianalyysiin. Jotkut pystysuuntaisista elektroforeesikennoista (säiliöt/kammiot) ovat yhteensopivia blot-järjestelmän kanssa, kuten mallit DYCZ-24DN, DYCZ-25D ja DYCZ-25E ovat yhteensopivia Western Blotting -järjestelmän mallin DYCZ-40D, DYCZ-40G ja DYCZ-40F kanssa, joita käytetään proteiinimolekyylin siirtämiseen geelistä kalvolle. SDS-PAGE-elektroforeesin jälkeen Western Blotting on tekniikka spesifisen proteiinin havaitsemiseksi proteiiniseoksesta. Voit valita nämä blottausjärjestelmät kokeellisten vaatimusten mukaan.
Elektroforeesivirtalähde
Tarvitset elektroforeesivirtalähteen saadaksesi sähköä geelin juoksemiseen. Liuyi Biotechnology tarjoaa valikoiman elektroforeesivirtalähteitä kaikkiin sovelluksiin. Mallit DYY-12 ja DYY-12C korkealla vakaalla jännitteellä ja virralla voivat täyttää korkean jännitteen vaatimuksen elektroforeesin. Siinä on seisonta-, ajoitus-, VH- ja vaiheittaiset sovellukset. Ne sopivat ihanteellisesti IEF- ja DNA-sekvensointielektroforeesisovellukseen. Yleiseen proteiini- ja DNA-elektroforeesisovellukseen meillä on mallit DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 ja niin edelleen, jotka ovat myös kuumamyyntivirtalähteitä elektroforeesikennoilla (säiliöt/kammiot). Niitä voidaan käyttää keski- ja pienjänniteelektroforeesisovelluksissa, kuten koululaboratorioissa, sairaalalaboratorioissa ja niin edelleen. Lisää virtalähteiden malleja, käy verkkosivuillamme.
Liuyi-brändillä on yli 50-vuotinen historia Kiinassa ja yritys voi tarjota vakaita ja laadukkaita tuotteita kaikkialla maailmassa. Vuosien kehitystyön ansiosta se on valintasi arvoinen!
Jos haluat lisätietoja meistä, ota meihin yhteyttä sähköpostitse[sähköposti suojattu] or [sähköposti suojattu].
Viitteitä Mitä on polyakryyliamidigeelielektroforeesi?
1. Karen Steward PhD polyakryyliamidigeelielektroforeesi, miten se toimii, tekniikkavaihtoehdot ja sen sovellukset
Postitusaika: 23.5.2022