Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) on herkkä ja nopea tekniikka, jota käytetään ensisijaisesti DNA-vaurioiden havaitsemiseen ja korjaamiseen yksittäisissä soluissa. Nimi "Comet Assay" tulee tuloksissa näkyvästä ominaisesta komeetan kaltaisesta muodosta: solun ydin muodostaa "pään", kun taas vaurioituneet DNA-fragmentit kulkeutuvat luoden komeetta muistuttavan "häntän".
Periaate
Comet Assayn periaate perustuu DNA-fragmenttien kulkeutumiseen sähkökentässä. Koskematon DNA pysyy solun ytimessä, kun taas vaurioitunut tai fragmentoitunut DNA siirtyy kohti anodia muodostaen komeetan "häntän". Hännän pituus ja voimakkuus ovat suoraan verrannollisia DNA-vaurion laajuuteen.
Menettely
- Solun valmistelu: Testattavat solut sekoitetaan matalan sulamispisteen agaroosin kanssa ja levitetään mikroskoopin objektilaseille yhtenäisen kerroksen muodostamiseksi.
- Solujen lyysi: Objektilasit upotetaan lyysiliuokseen solukalvon ja tumakalvon poistamiseksi, mikä paljastaa DNA:n.
- Elektroforeesi: Objektilasit asetetaan elektroforeesikammioon alkalisissa tai neutraaleissa olosuhteissa. Vaurioituneet DNA-fragmentit kulkeutuvat kohti positiivista elektrodia sähkökentän vaikutuksesta.
- Värjäys: Elektroforeesin jälkeen objektilasit värjätään fluoresoivalla väriaineella (esim. etidiumbromidilla) DNA:n visualisoimiseksi.
- Mikroskooppinen analyysi: Fluoresenssimikroskoopilla tai erikoisohjelmistolla komeettojen muodot analysoidaan ja parametrit, kuten hännän pituus ja intensiteetti, mitataan.
Kuva biorenderistä
Tietojen analyysi
Comet Assayn tulokset arvioidaan useiden avainparametrien perusteella:
- Hännän pituus: Edustaa etäisyyttä, jonka DNA kulkee, mikä osoittaa DNA-vaurion laajuuden.
- Hännän DNA-sisältö: Häntäseen siirtyvän DNA:n prosenttiosuus, jota käytetään usein DNA-vaurion kvantitatiivisena mittana.
- Olive Tail Moment (OTM): Yhdistää sekä hännän pituuden että hännän DNA-sisällön tarjotakseen kattavamman mittauksen DNA-vauriosta.
Sovellukset
- Genotoksisuustutkimukset: Comet Assayta käytetään laajalti arvioimaan kemikaalien, lääkkeiden ja säteilyn vaikutuksia solun DNA:han, mikä tekee siitä keskeisen työkalun genotoksisuustestauksessa.
- Ympäristötoksikologia: Se auttaa analysoimaan ympäristösaasteiden vaikutusta organismien DNA:han ja antaa näkemyksiä ekosysteemien turvallisuudesta.
- Lääketieteellinen ja kliininen tutkimus: Comet Assayta käytetään DNA:n korjausmekanismien, syövän ja muiden DNA:han liittyvien sairauksien tutkimiseen. Se arvioi myös syöpähoitojen, kuten sädehoidon ja kemoterapian, vaikutusta DNA:han.
- Elintarvike- ja maataloustieteet: Käytetään torjunta-aineiden, elintarvikelisäaineiden ja muiden aineiden turvallisuuden arvioimiseen ja niiden myrkyllisten vaikutusten tutkimiseen eläinmalleilla.
Edut
- Korkea herkkyys: Pystyy havaitsemaan vähäisiä DNA-vaurioita.
- Yksinkertainen käyttö: Tekniikka on suoraviivainen, joten se soveltuu suuritehoiseen seulomiseen.
- Laaja sovellus: Sitä voidaan käyttää erilaisiin solutyyppeihin, mukaan lukien eläin- ja kasvisolut.
- Kvantifiointihaasteet: Vaikka kvantitatiivinen analyysi tarjoaa kvalitatiivista tietoa DNA-vaurioista, se on vahvasti riippuvainen ohjelmisto- ja kuva-analyysitekniikoista.
- Kokeiluolosuhteet: Tuloksiin voivat vaikuttaa tekijät, kuten elektroforeesiaika ja pH, mikä edellyttää koeolosuhteiden huolellista valvontaa.
Rajoitukset
Comet Assay on korvaamaton työkalu biolääketieteellisessä tutkimuksessa, ympäristötieteessä ja lääkekehityksessä joustavuuden ja suuren herkkyytensä ansiosta DNA-vaurioiden havaitsemisessa ja korjaamisessa. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)tarjoaa vaakasuuntaisen elektroforeesikammion komeettamääritykseen. Tervetuloa ottamaan meihin yhteyttä keskustellaksemme aiheestaComet Assayprotokollaa.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) on erikoistunut elektroforeesiinstrumenttien valmistukseen yli 50 vuoden ajan oman ammattitaitoisen teknisen tiimimme ja T&K-keskuksen kanssa. Meillä on luotettava ja täydellinen tuotantolinja suunnittelusta tarkastukseen ja varasto sekä markkinointituki. Päätuotteemme ovat elektroforeesikenno (säiliö/kammio), elektroforeesivirtalähde, sininen LED-läpivalaisin, UV-läpivalaisin, geelikuva- ja analyysijärjestelmä jne. Toimitamme myös laboratoriolaitteita, kuten PCR-instrumentin, pyörresekoittimen ja sentrifugin laboratorioon.
Jos sinulla on ostosuunnitelma tuotteillemme, älä epäröi ottaa meihin yhteyttä. Voit lähettää meille viestin sähköpostitse[sähköposti suojattu]tai[sähköposti suojattu], tai soita meille numeroon +86 15810650221 tai lisää Whatsapp +86 15810650221 tai Wechat: 15810650221.
Skannaa QR-koodi lisätäksesi Whatsapp tai WeChat.
Postitusaika: 20.9.2024